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很多種細(xì)胞系培養(yǎng)基問題?

發(fā)布時(shí)間: 2024-01-10  點(diǎn)擊次數(shù): 1047次

 

1.怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識(shí)和培養(yǎng)條件?                                               

ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,包括細(xì)胞的來源,培養(yǎng)和凍存條件,以及相關(guān)

文獻(xiàn)等資料。                                                                                                     


2.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?                                                                         

培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199

同樣容易生長。總之,MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng);RPMI1640做懸浮細(xì)胞

培養(yǎng);各種目的無血清培養(yǎng)AIMV培養(yǎng)基SFM。新的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要詳查資料         


3.自己新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久?                                                             

我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃,避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢。培養(yǎng)基越新

鮮越好。                                                                                                         


4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?                                             

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在一到兩周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍?/span>

抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。                                                  


5.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?                                                                         

除了特殊篩選系統(tǒng)外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。           

為防止細(xì)菌、真菌污染,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉

素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。                                                                     


6.液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎?                                                                     

不可以!因?yàn)樵?20℃下,培養(yǎng)基中的鹽容易析出,培養(yǎng)基融化后,有的鹽可能無法重

新溶解,從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞容易破裂而死亡。               


7.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,顏色會(huì)偏暗紅色,且pH值越來越偏堿性?             

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中, 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而

培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基

偏堿之結(jié)果,將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時(shí),可以通入無菌過濾之CO2

以調(diào)整pH 值。                                                                                                 


8.為什么你公司液體培養(yǎng)基1640顏色發(fā)黃,是pH值不對(duì)嗎?                                   

不是。因?yàn)榕浞皆颍?640為堿酚紅型,其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,所

以是因?yàn)榉蛹t濃度低,而非PH值低。                                                                   


9.培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長的?                                                                   

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4,偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞

對(duì)PH值要求也不相同,原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對(duì)PH值變動(dòng)耐受差,無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。 總體來說,細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長。因此,

配制培養(yǎng)用液時(shí)可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過0.1um或0.2um濾膜過

濾時(shí),PH值會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。                                                                         


10.培養(yǎng)液滲透壓是怎樣影響細(xì)胞生長的?                                                             

當(dāng)細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的分子濃度不同時(shí)就會(huì)產(chǎn)生滲透壓。這種情況下,水分通過滲透流入或流出細(xì)胞,從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境。高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴(kuò)散出來導(dǎo)致細(xì)胞收縮,這種情況會(huì)使DNA和蛋白遭到破壞,細(xì)胞周期停滯以及最終使細(xì)胞死亡;反之,低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞腫脹破裂。                                                                     


11.為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅?                                                             

研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應(yīng),細(xì)胞培養(yǎng),尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),不使用加酚紅的培養(yǎng)基。                                                           


12.酚紅的作用是什么?                                                                                       

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。


13.你公司干粉培養(yǎng)基里含NaHCO3嗎?                                                                 

所有的干粉培養(yǎng)基中都不含NaHCO3 。請(qǐng)依據(jù)說明書或包裝袋上的標(biāo)注,在干粉培養(yǎng)基

溶解后添加NaHCO3 。                                                                                 


14.NaHCO3的作用是什么?                                                                                 與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。                                                         

15.我們實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)箱CO2濃度一直以來都是5%,這樣可以嗎?                               

當(dāng)然不可以,不同的培養(yǎng)基要求添加NaHCO3的量不一樣,如DMEM要求添加3.7g/L,

為了保持PH值穩(wěn)定,必須用高濃度的CO2平衡,一般不低于8%,而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,還有些培養(yǎng)基要求添加更少,那么這些培養(yǎng)基就要求較低的濃度平

衡,一般是5%。                                                                                             


16.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?                                                                   

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是

   如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。                                                   

丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養(yǎng)基中的終濃度為1mM。         


17.谷氨酰胺的作用是什么?                                                                               

幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的

能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長不良而死亡。

所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。                                                    

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺

的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。                   


18.在培養(yǎng)基中加入HEPES有何好處?                                                                   

培養(yǎng)基中的Buffer system是碳酸氫鹽,它可提供營養(yǎng),但卻在生理PH值條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer,加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)。                                                                                         

Hepes的貯存液濃度一般為1M,常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM,即5ml 1M的Hepes加入到200ml培養(yǎng)基中。                                                                     


19.GlutaMAX-Ⅰ是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ?這個(gè)二肽有多穩(wěn)定?     

GlutaMAX-Ⅰ是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種

肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。                                                         

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定,即使在121℃滅菌20min, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最

小的降解;而在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎降解。                                         

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的,但其在溶液中不穩(wěn)定,經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解,確

切的降解率一直沒有最終確定。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于一些細(xì)胞具

有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xì)胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品。                                 


20.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基?                                                         

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培

養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,細(xì)胞大多無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活。   

 

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