對于ATCC細胞的培養常出現的技術問題我們如何找出答案？

　　1.培養用液pH對細胞生長有何影響？

　　由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

　　2.何為傳代培養？

　　在進行傳代時，如果是懸浮細胞，只需簡單稀釋即可，若需*更換培養液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養液中即可。一般細胞每毫升接種數量為5´104-8´105個，傳代密度太低，細胞容易死亡，表現出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養過程中，培養液會由于pH下降而呈現黃色，表明細胞已經達到最大密度需要換液或進行傳代培養。如果是單層貼壁的細胞，等長滿培養瓶表面，即可進行傳代，多數細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來，以促進傳代培養。

　　3.細胞培養的環境有何要求？

　　①無污染環境

　　培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

　　②恒定的溫度

　　維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

　　③氣體環境

　　氣體是人體細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。